Объединенные эфирные пробы помещают в колбу с изогнутой трубкой и удаляют эфир в водяной бане. После этого колбу охлаждают и экстракт ИУК используют по назначению.

Извлечение ИУК из семян

500 — 1000 кленовых или ясеневых семян нагревают в сушильном шкафу, а в домашних условиях — в духовке при температуре +100 — +105 °С в течение 40 минут, затем температуру снижают до +40 — +60 °С и высушивают семена в течение 18 — 24 часов. В домашних условиях семена можно высушивать на батарее центрального отопления.

Высушенные семена измельчают и проводят экстракцию ИУК серным эфиром описанным ранее способом.

Извлечение гиббереллиновых гормонов из семян

Семена, желательно с большим зародышем, растирают в ступке с небольшим количеством охлажденного этилового спирта и переносят в колбу. Доводят объем спирта из расчета 40 — 50 мл на 1 г семян. Смесь тщательно встряхивают в течении 30 минут и фильтруют. Остаток вновь

серный 1фир можно получить в результате реакции серной кислоты и этилового спирта.

** подобная проба может сохраняться в темноте до двух месяцев.

заливают спиртом и повторяют экстрагирование 2 — 3 раза. Объединенный фильтрат помещают в водяную баню при температуре воды +40 — +50 °С и выпаривают до исчезновения спиртового запаха. Водный остаток доводят до 30 мл и подкисляют концентрированной фосфорной кислотой до рН2,8 — 3,0. Если хотят получить кристаллическую соль гиббереллиновых кислот, к раствору добавляют в три раза больший объем этилацетата* и осторожно смешивают. Этилацетат испаряют в токе воздуха (можно использовать фен), а осадок используют или сохраняют в темном прохладном месте.

Извлечение кинетинов из растений

Нижнюю часть стеблей травянистых растений или пазушные почки растирают с небольшим количеством этилового спирта, помещают в колбу и доводят объем спирта из расчета 40 — 50 мл на 1 г растительного материала. Смесь тщательно взбалтывают и фильтруют. Осадок обрабатывают спиртом еще 2 — 3 раза и из объединенного фильтрата на водяной бане при температуре +40 — +50 °С или с помощью фена удаляют спирт до исчезновения спиртового запаха.

Оставшийся раствор доводят до объема 25 — 30 мл и подкисляют концентрированной азотной кислотой до рНЗ,8. Постепенно добавляя в раствор 5%-й раствор азотнокислого серебра, добиваются максимального получения осадка, который после отстаивания фильтруют. Осадок заливают водой до 30 мл и подкисляют соляной кислотой до рНЗД В результате серебро переходит в раствор, и его удаляют путем фильтрации.

Оставшийся осадок заливают этиловым эфиром, взбалтывают и фильтруют. Кинетины переходят в эфир. Оставшийся осадок опять заливают эфиром и фильтруют. Процедуру повторяют 2 — 3 раза и из объединенного фильтрата в водяной бане при температуре +40 —• +50 °С или с помощью фена удаляют эфир до исчезновения запаха.

Извлечение кинетинов из семян и плодов

Незрелые семена или плоды перетирают с 200 мл 80%-го этилового спирта, переносят в колбу, которую закрывают пробкой и выдерживают в холодильнике при +4 °С 12 часов. Смесь фильтруется, остаток заливается холодным 80%-м спиртом и после встряхивания фильтруется вновь. Из объединенного фильтрата выпаривают спирт в потоке холодного воздуха до исчезновения запаха. Со временем на дно колбы выпадает осадок солей кинетиновых гормонов.

При применении гормонов хотелось бы подчеркнуть:

— во-первых, различные роды, виды кактусов, иногда линии, а порой одно и то же растение, но в разных фазах жизненного цикла, имеют неодинаковую чувствительность к концентрации гормонов. Так, для снятия апикального доминирования у Mammillaria pringlei автору потребовалось применить кинетин в концентрации 10 мг/л, Pamdia maxima — 5 мг7л, Gymnocalvcium multiflorum — 15 мг/л, Astrophytum ornatum — 90 мг/л. Подобный пример можно проиллюстрировать и на растениях одного рода: Mammillaria pringlei — 10 мг/л, Mammillaria hahniana — 8 мг/л, Mammillaria plumosa — 3 мг/л. И на кактусах, принадлежащих к одному виду: Gymnocalycium intertextum в возрасте трех месяцев — 0,03 мг/л, одного года — 0,1 мг/л, пяти лет — 5,0 мг/л, восьми лег - 17,0 мг/л. То есть подбирать концентрацию гормональных препаратов следует осторожно, от низших концентраций к высшим, учитывая, что передозировка приведет лишь к отрицательным результатам;

— во-вторых, гормоны и другие ростовые вещества являются биологически- активными соединениями, легко вступают в физико-химические связи с органикой почвы и поглощаются микроорганизмами. Поэтому метод обработки растений гормонами при поливе должен практиковаться на легких почвах или при гидропонной культуре;

— в-третьих, при контактном методе лучше пользоваться пастами, приготовленными на основе ланолина, вазелина, агара (в крайнем случае можно применить желатин или крахмальный клейстер). Участок стебля для нанесения пасты подготавливают следующим образом: удаляют лишнее опушение, а для удаления кутикулы — обрабатывают мыльным раствором, по ни в коем случае не этиловым спиртом, т.к. он является производным этилена и ипгибирует процессы роста. Пасту наносят небольшой каплей, которую обновляют раз в сутки (естественно, что кактус должен быть в состоянии роста и находиться при несколько повышенной температуре и влажности -— в оранжерейных условиях);

— в-четвертых, применение гормонов пройдет успешнее, если они будут использованы совместно с витаминами, а ауксины — еще и с сахарами (глюкоза, фруктоза).

Рис. 72. Вещества группы биоса.

Перейдем к группе Б регуляторов ростовых процессов.

В эту группу входят вещества типа витаминов и простых органических низкомолекулярных кислот, находящихся в почве — продукты жизнедеятельности грибов и микроорганизмов, а также вещества, синтезируемые в растительных клетках.

Основная часть регуляторов группы Б в почве представлена комплексом, называемым «биос».

Биос впервые был выделен из дрожжей как вещество, чрезвычайно стимулирующее размножение дрожжевых клеток. Лишь в 1936 году химиком Кеглем, который открыл наиболее активный компонент биоса — биотин, было установлено, что биос неоднороден.

Основу биоса составляют три компонента:

витамин В 1 (синонимы: тиамин, аневрин, биос III) — стимулирующий в чистом виде рост корня в длину;

витамин Н (синонимы: биотин, биос II) — как уже говорилось, является наиболее активным веществом биоса, стимулирует рост стебля и дает эффект даже при разведении 0,0000025 мг/л;

мезоинозит (синонимы: мионозит, биос I) — циклический спирт, стимулирующий клеточное деление и являющийся связующим звеном двух первых компонентов биоса в регуляторных процессах.

Максимальный эффект в опытах in vitro наблюдается при совместном действии этих трех основных составляющих биоса.

Заслуга в «производстве» большей части биоса принадлежит грибам. Почвенные виды грибов находятся в постоянном симбиотическом комплексе с корнями растений. Даже в столь жестких условиях, в которых произрастают в природе кактусы, на их корнях можно увидеть гифы и плодовые тела грибов.

Вещества биоса могут быть выделены в лабораторных или домашних условиях. Для этого живую культуру дрожжей заливают чуть сладковатым раствором сахара, который через сутки отфильтровывают и нагревают до +55 — +60 °С в течение 30 минут, при этом большинство живых дрожжевых клеток погибает. Фильтрат можно добавлять в питательный раствор при гидропонном содержании кактусов или подкармливать им растения при почвенном культивировании. В последнем случае следует учитывать, что биологически-активные вещества активно потребляются не только корневыми волосками, но и в значительной степени почвенной микрофлорой.

Поступая, в основном, извне, компоненты биоса имеют свойство накапливаться в тканях. Так, довольно много их содержится в семенах, как в покоящихся, в виде неактивных комплексов, так и в прорастающих. Этим можно воспользоваться при стимулировании прорастания семян кактусов солодом (проросшими семенами злаков), о чем будет сказано позднее.