Тщательное наблюдение, своевременное периодическое измерение параметров клинических показателей у подопытных животных в процессе постановки опытов выявили, что свежая надземная часть аконита круглолистного в данной дозе для свободных от гельминтов овец не является опасной; признаков отравления у них не наблюдалось.
Пятая овца по копрологическим данным в кишечнике имела авителлины. После дачи ей свежих листьев аконита круглолистного, собранного в 8 часов утра при температуре воздуха на уровне стеблей растения 4-5,2°, наблюдались некоторые признаки отравления.
Вторая группа опытов проводилась на 5 взрослых (3—5-летних) овцематках. Овцы были клинически здоровыми. При копрологическом исследовании до опытов в кале у одной овцы обнаружены членики тизаниезий и авителлин. Гельминтоларвоскопия по Фюллеборну установила у трех овец, в том числе и у зараженной анопоцефалидами, яйца нематодируса с подвижными личинками внутри.
Условия опытов были такие же, что и в первой группе. Каждый раз задавалась свежая трава аконита круглолистного, собранного при температуре воздуха в пределах 6—20°.
Как и в первой группе, здоровые овцы, получавшие аконит, в дозе 40 г/кг не проявляли признаков отравления, хотя зеленая масса аконита задавалась в количестве 2000—2500 г на голову животного. А овца, носившая в кишечнике тизаниезий и авителлин, внешне не отличавшаяся от остальных овец данной группы, после получения аконита заболела с признаками отравления. Однако смерть у животного не наступила. Несколько интенсивнее было слюнотечение из ноздрей. Угнетение общего состояния животного длилось дольше (около шести часов). Аппетит отсутствовал в течение 8 часов, аритмия желудочков сердца, начавшаяся через 1.5 часа после дачи овце травы, восстановилась только по истечении одних суток от начала опыта. В дальнейшем овца выздоровела. Через 7 дней она была убита для общественного питания и в тонким отделе кишечника были обнаружены тизаниезии и авнтеллины, вес которых составил 104 г.
Обсуждение результатов. Наблюдения и опыты показали что все виды домашних животных поедают аконит круглолистный в естественных условиях. Следовательно, к нему не выработан оборонительный рефлекс. Отсутствие признаков отравления у овец, получавших сравнительно большие дозы (2—2,5 кг) свежей травы аконита круглолистного подтверждает его неядовитость для здоровых животных.
Овцы, страдающие кишечными цестодозами, вероятно, более чувствительны к акониту круглолистному, так как в обеих группах опытов проявляли признаки отравления именно и овцы, которые заведомо были цестодозными.
Попытки выяснить вопрос о том, является ли указанный факт случайным совпадением или представляет собой закономерность, привели нас к постановке специальной серии опытов, которые описываются в отдельной главе.
6. Изменение биологических свойств аконитовых алкалоидов
Установившееся в киргизской народной медицине и ветеринарии строгое правило, рекомендующее пить только горячий отвар клубней ядовитого аконита джунгарского или каракольского, по всей вероятности, основано на разрушающем действии высокой температуры на их яды.
А. П. Орехов (1955), Т. Генри (1956) и многие другие исследователи аконитовых алкалоидов пишут, что под влиянием высокой температуры в присутствии кислот или щелочей от сложных аконитовых алкалоидов, состоящих из аминоспирта и кислот отщепляется уксусная кислота, при этом заметно снижается их токсичность. Дальнейший гидролиз приводит к отщеплению ароматических кислот, а оставшийся простой аминоспирт почти теряет первоначальную токсичность алкалоида.
Исходя из этих данных, мы поставили перед собой задачу выяснить факторы, влияющие на биологическую активность аконитовых алкалоидов. Для этого была проведена серия опытов на 334 лабораторных животных (214 крысы, 120 мышей).
Методика исследования. Первая серия опытов была проведена на 94 крысах. Ставилась задача выяснить влияние температуры на токсичность алкалоидов. Металлическим зондом в желудок животных вводились LD100 сумм алкалоидов аконита джунгарского (СААД), каракольского (СААК), а также бромгидрата аконитина в четырех группах опытов.
В первую группу входили животные, получавшие растворы сумм алкалоидов, приготовленные при комнатной температуре (16—18°), во вторую группу — животные, которым вводились растворы, подвергнутые кипячению при 98—100° в течение 10 мин затем остуженные до 38—40° Крысы третьей группы получали растворы сумм алкалоидов после 30-минутного кипячения. Крысам же четвертой задавались растворы, обработанные таким же способом на протяжении 30 мин, но затем медленно охлажденные при комнатной температуре и дополнительно помещенные в холодильник с температурой + 7° на 20—30 мин.
Вторая серия опытов посвящена выяснению влияния низкой температуры окружающей среды на организм животного, получавшего токсические дозы аконитовых алкалоидов. Опыты ставились в зимнее время на 20 крысах. Группа из 10 крыс помещалась в холодильник (температура в нем +7°) на 2 часа до введения, затем оставалась еще на 4 часа после введения препарата, 10 крыс второй группы, получавших ту же дозу препарата, содержались при комнатной температуре (16—18°) Обе группы получали по 15 мг/кг СААН, что соответствует ее LD50. За обеими группами велось одновременное беспрерывное наблюдение 8—10 часов, а затем ежедневно на протяжении последующих 10 дней.
В обеих сериях опыты для каждого препарата проводились в один и тот же день. Каждый раз готовился общий раствор алкалоидов в день опыта, а затем часть препаратов подвергалась температурному воздействию.
Результаты исследования. После 10-минутного кипячения растворов сумм алкалоидов, а также аконитина наблюдалось заметное снижение токсичности. А при воздействии высокой температурой (98—100°) в течение более продолжительного времени (30 минут) все препараты теряли свою токсичность. При этом в наших опытах не было ни одного случая смерти животных, тогда как такие же дозы растворов, но некипяченые, вызывали смертельное отравление у всех животных.
Очень любопытная картина наблюдалась в четвери группе опытов. Кипяченые растворы СААД, СААН и СААК после охлаждения снова восстанавливали прежнюю токсичность, вызывая смертельное отравление у большинства опытных животных. А водные растворы бромгидрата аконитина, подвергнутые воздействию холода, не достигали прежнего уровня своей активности, хотя и имели тенденцию к некоторому повышению токсичности относительно горячих растворов. При этом из шести подопытных крыс пала 1 спустя 25 мин после дачи охлажденного раствора алкалоида, что видно из табл. 20.
По результатам второй серии опытов сделать какие-либо выводы не представляется возможным, хотя количество павших в первой группе больше на одно животное. Заметная разница в средней продолжительности жизни смертельно отравленных крыс наводит на мысль о том, что в условиях холода, яд действует на организм более медленно и продолжительнее, чем при нормальной температуре (табл. 21).
Обнаруженный нами факт спонтанного повышения токсичности экстракта аконита круглолистного в присутствии уксусной кислоты привел к постановке специальных опытов на 10 крысах и 120 мышах. При проведении опытов была применена следующая методика.
Методика исследования. В первой серии опытов, состоят из 8 групп белых мышей, испытывался настой (1 10) свежих листьев аконита круглолистного в дозах от 25 до 75 мл/кг. Первая группа подопытных мышей в количестве 6 животных получала по 25 мл/кг свежеприготовленного (ex tempor) настоя без примеси уксусной кислоты. Температура настоя в момент перорального введения 20—22°. Второй группе животных вводился тот же настой в той же дозе и температуре, и с содержанием 1% уксусной кислоты, или в 25 мл/кг настоя содержалось 0,25 мл ледяной уксусной кислоты. Третья группа (12 мышей) получала по 50 мл/кг настоя свежих листьев аконита круглолистного при той же температуре без примеси уксусной кислоты. Четвертая группа, состоящая из 10 мышей, получала ту же дозу, при той же температуре с примесью 1 % уксусной кислоты. Животные пятой и шестой групп по 6 мышей в каждой, получали по 75 мл/кг свежего настоя при вышеуказанной температуре, разница в условиях опытов заключалась только в том, что в испытуемом настое у шестой группы содержалось 1% уксусной кислоты. Мышам седьмой и восьмой групп, по 6 животных в каждой, вводился настой суточной давности изготовления при его температуре 17-18° в дозе по 50 мг/кг, причем настой восьмой группы содержал 1 % уксусной кислоты.
