3. Получив количество мицелия, необходимое для производства грибницы, верните штамм на хранение до следующего использования. Не ждите что мицелий, росший несколько лет при оптимальных температурах, сохранит свойства первоначальной культуры, из которой он был получен. Вследствие многочисленных делений клеток и непрерывных пересадок с большой вероятностью выделился подштамм, который имеет отдалённое сходство с жизнеспособностью, внешним видом и потенциалом плодоношения оригинала.

4. Если все усилия направленные на сохранение жизнеспособного штамма провалились, следует выделить новый из мультиспоровой культуры.

5. Другой альтернативой являются постоянные эксперименты с целью создания гибрида штаммов скрещивая дикариотические мицелии двух генетически отличающихся родителей. (Однако эксперименты с Agaricus brunnescens показали что большая часть гибридов плодоносит меньше, чем кто-либо из задействованных в скрещивании штаммов. И лишь меньшая их часть даёт хорошие урожаи.)

Домашние культиваторы могут выборочно развивать штаммы грибов выбирая мицелий по следующим нескольким признакам:

1. Ризоморфизм — быстро развивающийся и разрастающийся мицелий

2. Чистота штамма — отсутствие ватных секторов.

3. Чистота мицелия — отсутствие конкурирующих микроорганизмов (бактерий, плесеней и клещей).

4. Время задержки реакции в ответ на создание условий благоприятствующих образованию примордий.

5. Количество появившихся примордий.

6. Коэффициент прорастания появившихся примордий.

7. Размер, форма и/или цвет плодовых тел.

8. Общий урожай.

9. Сопротивляемость заболеваниям.

10. Чувствительность/переносимость С02.

11. Температурные ограничения.

12. Простота сбора урожая.

Используя эти характерные особенности, грибные селекционеры могут разумно оценивать качество штаммов, и со временем научатся выбирать из них те, которые наилучшим образом соответствуют их предпочтениям.

ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР: СПОСОБЫ КОНСЕРВАЦИИ ГРИБНЫХ ШТАММОВ

Получив чистый изолированный штамм, благоразумным решением будет сохранить его путём консервации. Консервированные культуры или как их обычно называют «скосы» — это стеклянные пробирки наполненные стерильным носителем и проинокулированные мицелием. Подходящий размер пробирки для хранения культур 20x100 мм, с плотно подогнанной пробкой. У каждого опытного культиватора имеется своя коллекция культур называемая «банк видов». Банк видов является неотъемлемой частью процесса разведения грибов. С его помощью грибовод может сохранять штаммы годами.

Для приготовления скосов сначала смешайте компоненты агаровой среды, используя обсуждавшиеся выше в этой главе формулы. Наполните пробирки на треть от их высоты, заткните ватным тампоном и накройте алюминиевой фольгой, или просто закройте пробкой подходящего размера. Стерилизуйте в скороварке 30 минут при давлении в 1,05 атм (15 psi). Дождитесь пока давление в скороварке сровняется с атмосферным и переместите её в стерильную комнату не открывая. Достаньте пробирки, мягко взболтайте их для равномерного распределения питательных веществ и расположите их под углом 15–30 градусов до охлаждения и затвердевания.

По мере готовности проинокулируйте скосы фрагментами мицелия. Пометьте каждую пробирку датой, типом агара, видом и штаммом. Для подстраховки сделайте как минимум три скоса на каждый штамм. Инкубируйте в течении недели при температуре 24 °C. Как только мицелий покроет основную поверхность агара и на поверку окажется свободным от заражений, помещайте на хранение при температуре 2–4 °C. При таких температурах снижается метаболическая активность большей части мицелия и практически прекращается поглощение питательных веществ. В идеале неплохо бы проверять жизнеспособность хранимого мицелия каждые полгода, высаживая его фрагменты в новые чашки Петри. После того как мицелий захватит 2/3 поверхности носителя в чашке, отберите сильный (ризоморфный) мицелий и проинокулируйте новые скосы. Подпишите и храните их пока они вам не понадобятся. Зачастую, проращивание такой миникультуры становится хорошей проверкой хранимого штамма на всхожесть и плодовитость.

Превосходным способом сохранения культур является передача дубликатов видов и штаммов знакомым коллегам культиваторам. Штаммы грибов теряются, иногда с большей лёгкостью, чем от них того ожидают. А, потеряв, вы никогда уже не сможете их вернуть.

Вышеописанный метод помогает надёжно сохранять культуры в большинстве случаев. Тем не менее, некоторые алчные культиваторы с лёгкостью могут обзавестись пятидесятью, а то и сотней штаммов и необходимость постоянного поддержания их жизнеспособности может стать утомительной и обременительной. Когда библиотека культур разрастается до таких объёмов, существует несколько дополнительных мер позволяющих увеличить срок хранения штаммов.

Простейший способ консервации культур на долгий срок использует тонкий слой стерильного минерального масла наносимого на живой мицелий после его прорастания в пробирке. Минеральное масло не токсично для мицелия, сильно снижает его метаболизм и препятствует испарению влаги из агаровой основы. После этого культура хранится при 3–5 °C до востребования. Недавние исследования (Perrin, 1979) показали, что все 30 видов грибов хранимых под минеральным маслом на протяжении 27 лет произвели живой мицелий. Для возобновления штаммов скосы были перевёрнуты вверх ногами для того чтобы стекло масло, и затем инкубированы при 25 °C. В течение трёх недель каждый скос показал обновлённые признаки роста и, будучи перенесёнными на агар, дали незаражённые культуры.

Четыре других способа консервации включают: погружение скосов в жидкий азот (дорогостоящая процедура); инокуляция стерильного компоста на основе конского навоза и соломы с последующим хранением при 2–3 °C (см. Главу V о приготовлении компоста); инокуляция носителя на основе опилок и отрубей мицелием грибов предпочитающих дерево (см. Главу III об альтернативных носителях мицелия); или хранение спор в тёмном прохладном месте — возможно наипростейший способ для домашних культиваторов.

Независимо от используемого способа консервации помните, что для грибов естественно плодоносить, спорулировать и развиваться. Методы культивации должны развиваться вместе с грибами и культиватор должен выборочно изолировать и поддерживать многообещающие штаммы по мере их появления. Так что не удивляйтесь, если спустя пять лет хранения, штамм слабо похож на оригинальный по характеристикам плодоношения и форме.

ГЛАВА 3. РАБОТА С ЗЕРНОМ

РАЗВИТИЕ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ЗЕРНОВОЙ ГРИБНИЦЫ

Зерновая грибница используется для инокуляции приготовленного субстрата. Она состоит из материала-носителя полностью колонизированного мицелием. Тип носителя зависит от вида культивируемых грибов, хотя большинство изготовителей зерновой грибницы выбирают рожь. История развития способов приготовления инокуляционного материала для выращивания Agaricus brunnescens наглядно демонстрирует прогресс в этой области за последние 100 лет.

В 19 веке культиваторы Agaricus получали инокуляционный материал собирая его в естественных условиях произрастания. Далее такую «девственную грибницу» дополняли такими же естественными питательными материалами, в данном случае конским навозом. Также иногда использовался отработанный субстрат от предшествующих заходов. Такого рода инокуляционный материал содержал большое количество контаминантов и паразитов, в результате урожай получался небольшим. Для перехода к более серьёзному, коммерчески выгодному выращиванию грибов необходимо было разработать методики гарантирующие получение качественного мицелия в больших количествах.

Появление техник работы с чистой культурой, размножение мицелия путём проращивания спор или клонирования ткани грибов сменило собой использование дикорастущей грибницы. С этого момента культиваторы смогли быть уверенными не только в качестве инокуляционного материала, но и с некоторой долей достоверности прогнозировать свойства штамма. Впервые в истории появилась возможность селекции и развития высокоурожайных штаммов благодаря возможности сохранения культуры на специально приготовленном субстрате. Стерилизованный, мелкопорубленный компост стал наиболее предпочитаемым носителем исходной чистой культуры и на годы вперёд стал стандартом индустрии производства Agaricus.