1. стул и устойчивый стол с гладкой поверхностью;

2. пропановая горелка, спиртовка или бутановая зажигалка (рекомендуем спиртовый факел, немного спирта налитого на крышку жестяной кофейной банки — прим. ред.);

3. чётко помеченный пульверизатор с 10 % раствором гидрохлорида натрия (белизны, отбеливателя);

4. стерильные чашки Петри и пробирки;

5. самоклеющиеся листочки (или лейкопластырь), блокнот, ручка и нестираемый маркер;

6. нож для агара (скальпель) и инокуляционная петля (рекомендуем жесткий крючок — прим. ред.).

Все эти предметы должны всегда оставаться в лаборатории. Если что-то из этого было вынесено, перед возвращением убедитесь в абсолютной чистоте предмета.

Поддерживать в лаборатории условия близкие к стерильным можно простой тщательной уборкой, с частотой зависящей от частоты использования помещения. Степень тщательности будет зависеть от насыщенности воздуха спорами в вашем конкретном случае. В зимний период объём свободно перемещающихся спор радикально снижается, тогда как весной и летом можно заметить очевидный рост этого объёма. Следовательно, в эти периоды пикового роста количества контаминантов потребуется большая тщательность в уборке. Ещё более важно выносить из лаборатории все заражённые банки и чашки Петри способом, не представляющим угрозы для стерильности лаборатории.

Завершив обустройство лаборатории необходимо строго и неколебимо блюсти в ней жёсткую гигиену. Помещение следует мыть с дезинфектантом, полы со шваброй и напоследок распылять 10 % раствор белизны из пульверизатора. После распыления в лабораторию нельзя входить в течение 15 минут, пока не осядут все взвешенные в воздухе частицы. Вы ДОЛЖНЫ проводить весь комплекс гигиенических процедур перед каждой инокуляцией. Запомните, как правило: заражение проще предупредить, чем уничтожить после появления.

Стерилизацию помещения необходимо проводить в течении 30–60 минут с помощью специальной бактерицидной лампы (продается в магазинах мед. оборудования и в специализированных магазинах по продаже осветительного оборудования, цены колеблются в пределах 300–600 рублей). Или с помощью лампы ДРЛ с удаленной внешней колбой, являющейся эквивалентом бактерицидной ртутной лампы высокого давления.

Такую лампу можно изготовить самому. Для этого необходимо собрать обычную установку для лампы ДРЛ (дроссель + патрон + лампа), а у самой лампы, аккуратно отбить защитную стеклянную колбу.

Прежде чем продолжать, необходимо напомнить об осторожности. Стерильная работа требует концентрации, внимания к деталям и твёрдости руки. Работайте в пределах разумных промежутков времени, а не до полного изнеможения. Никогда не оставляйте без присмотра спиртовку или бутановую горелку и всегда помните о том что в замкнутом пространстве очень быстро заканчивается запас кислорода.

Некоторые грибоводы выводят войну с контаминантами за пределы разумного и иногда даже во вред собственному здоровью. Начинают «бойню» в лаборатории, накачивая её токсичными фунгицидами и бактерицидами, подвергая себя воздействию чрезвычайно опасных химических веществ. Вот был случай, когда лаборант вошёл в помещение, основательно накачав его гермицидом на основе фенола (карболовой кислоты). Из-за высокой концентрации яда он потерял чувство опасности и через несколько минут испытал сильное затруднение дыхания, онемение конечностей и конвульсии. Эти симптомы продержались несколько часов, и он полностью не восстановился даже через несколько дней. А вот ещё был случай, один человек установил в рабочем главбоксе (см. ниже — прим. ред.) коротковолновую ультрафиолетовую (кварцевую) лампу и проводил инокуляции голыми руками в течение месяца даже не подозревая об опасности. Источник света такого типа может вызвать рак кожи после продолжительного воздействия. Существуют альтернативные способы и средства, не причиняющие или причиняющие незначительный вред здоровью и позволяющие бороться с контаминантами также, а иногда и более эффективно.

Если, несмотря на все ваши сверхусилия сохраняется высокий уровень контаминации, есть несколько дополнительных способов повышения стерильности. Первый, самый простой и недорогой, использует коллоидный раствор лёгкого масла распыляемый в воздухе лаборатории; второй включает в себя изготовление камеры с неподвижным воздухом, т. н. главбокс (glovebox — ящик с перчатками); а третий относительно дорог, т. к. требует использования высокоэффективных микронных фильтров.

1 — При распылении стерильного масла создаётся облако крайне вязких, маленьких капель. По мере оседания оно связывает все находящиеся в воздухе частицы. В этом способе используется триэтиленгликоль, испаряемый с поверхости подогреваемого тампона. Мелкодисперсный и более летучий, чем минеральное масло, триэтиленгликоль не оставляет сколько-нибудь заметной масляной плёнки. Использование триэтиленгликоля не отменяет стандартные меры по поддержанию гигиены.

2 — Главбокс — это воздухонепроницаемая камера, которая предоставляет условия для создания стерильной среды, в которой и проводится работа с культурами. Простейшая конструкция представляет собой ящик из фанеры, со смотровым окошком. В отверстиях для рук закрепляются перчатки, в которые вставляются руки. Иногда вместо перчаток передняя часть ящика прикрываются сменной хлопковой тканью, которую следует периодически стерилизовать. Главное преимущество главбокса заключается в том, что он, являясь уменьшенным в масштабе и недорогим подобием лабораторной комнаты, предоставляет удобный для чистки объём, в котором нет или почти нет движения воздуха и можно спокойно работать со стерильными культурами.

3 — Современные лаборатории решают проблему инфекциии переносимой по воздуху установкой высокоэффективных воздушных фильтров частиц (high efficiency particulate air (HEPA) filter). Эти фильтры задерживают все частицы диаметр которых превышает 0,1–0,3 микрона, т. е. меньше любых спор грибов и практически всех бактерий (суть там довольно проста, воздух продувается через наэлектризованную высоким напряжением многослойную пластиковую сетку или фильтр и вся пыль прилипает к ней — прим. ред.). НЕРА-фильтры встраиваются в т. н. ламинарные шкафы. В некоторых стерильных лабораториях из НЕРА-фильтров набирается целиком герметичная стена или потолок и через них подаётся внешний воздух. В результате внутри лаборатории создаётся позитивное давление, которое не даёт проникнуть нестерильному воздуху. Устройство и типы ламинарных шкафов подробно обсуждаются в приложении IV.

У некоторых культиваторов практически не возникает проблем, при том что они работают в, казалось бы, совсем примитивных условиях (быстрые движения натренированных рук и понимание сути действий позволяют достичь очень высокого уровня стерильности — прим. ред.). Другие испытывают явные проблемы с постоянными заражениями и им приходится вкладываться в высокотехнологичные устройства контроля окружающей среды. Каждые конкретные условия вынуждают принимать определённые контрмеры. И независимо от того выращиваете ли вы грибы дома или организовываете работу лаборатории, вы испытаете одинаковые трудности отличающиеся лишь в масштабах.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ АГАРА

Завершив обустройство стерильной лаборатории следующим шагом можно приступать к приготовлению питательного носителя на основе агара. Агар — это вырабатываемое из морских водорослей студнеобразующее вещество, наподобие, но несколько более эффективное, чем желатин. Существует много рецептов приготовления обогащённых агаровых носителей пригодных для разведения грибной культуры. Стандартными можно считать картофельный (Potato Dextrose Agar (PDA)) и солодовый (Malt Extract Agar (MEA)) агары, которые нередко дополняют дрожжами в качестве питательной добавки. В микологических журналах часто упоминаются агары на пептоне и неопептоне — два самых доступных источника протеина для грибного мицелия. Есть ещё один тип агара, который авторы рекомендуют, на бульоне от варки ржи или пшеницы с добавлением солодового сахара (или мальтоза — дисахарид, образованный двумя остатками глюкозы).