В чистую стеклянную емкость (см. выше) смываем споры с отпечатка водой из шприца. Можно перед смыванием соскрести споры концом иглы. Снова втягиваем воду в шприц, уже со смытыми спорами. (Чашки Петри хороши тем, что все это можно делать под приоткрытой крышкой, поэтому в будущем удобно отпечаток сразу делать на простерилизованной/стерильной чашке Петри). Взбалтываем шприц. Сквозь ватку в дырочку вводим иглу шприца, впрыскиваем примерно по кубику в каждую 200-мл. баночку. Убираем баночки в темное, теплое (28 С) место на неделю-две.
Через некоторое время смотрим, что выросло. Мицелий — чисто белый, на сене часто растет характерными красивыми «перьями». Если мицелий вырос, о возне со шприцами можно надолго забыть.
Рассада — > плодовые тела.
Когда мицелий зарастет почти весь объем баночки, рассада готова, и пора готовить посуду покрупнее. Размер ее ограничивается только тем, в чем вы будете эту посуду пастеризовать. Хороши банки из-под венгерских огурцов-помидоров. На этом этапе дырки в крышках не нужны.
Пастеризуем, как на предыдущем этапе, примерно час. Даем чуть-чуть остыть, ослабляем крышку, так, чтобы вода могла стечь, переворачиваем кверху дном. Когда вода сольется, наклоняем банку, чтобы слить воду, оставшуюся в крышке. Остужаем банки до комнатной температуры.
Теперь из баночки с рассадой куски поросшего мицелием сена можно просто перенести чистым пинцетом в большие банки с сеном. Эту процедуру тоже лучше выполнять в максимально стерильных условиях. Минимум стерильности: протереть спиртом/хлоркой стол и крышки банок, переносить мицелий быстро, как можно меньше приподнимая заранее ослабленные крышки, каждый раз дезинфицировать пинцет хотя бы в стакане с кипятком.
После пересева мицелия важно, чтобы крышки не были закручены слишком сильно — внутрь должен понемногу поступать воздух. Опять-таки ставим банки в темноту и тепло. Постепенно мицелий зарастает все сено. Можно перекинуть его в новые банки с пастеризованным сеном, можно оставить на урожай, начав выставлять банки на свет.
На этом этапе поверхность можно присыпать землей/компостом/торфом, предварительно простерилизованным (пропаренным). Процедура эта называется в англоязычной литературе «casing», и несколько улучшает результаты, но не настолько, чтобы непременно этим заморачиваться. Грибам достаточно даже неяркого света несколько часов в день, лучше — естественное освещение. Если вы не хотите потом выковыривать грибы со дна, лучше обернуть низ банки фольгой или плотной бумагой.
Когда плодовые тела начинают быстро расти, можно дать им возможность расти за пределы банки, создав микропарничок из обрезанной пластиковой бутылки или пакета, охваченного на горле банки канцелярской резинкой. Если набивать банки сеном не доверху, их вполне можно не открывать вплоть до сбора урожая.
Перебрасывать мицелий, то есть размножать его вегетативно, можно довольно долго, но постепенно он начинает расти все хуже, этот момент хорошо отследить и дать грибам размножиться половым путем — собрать и снова прорастить споры.
Сено годится любое, но лучше всего растет почему-то на осенней, желтой, умершей естественной смертью траве. Помните, что грибы любят накапливать в себе свинец и прочие тяжелые металлы, поэтому сено лучше брать подальше от машин и дорог. Удачи!
ТЕХНОЛОГИЯ ПЕРЕНОСА СПОРОВОГО ОТПЕЧАТКА В ШПРИЦ
Psilocyber
ПРИМЕЧАНИЕ: Максимальная эффективность этих инструкций достигается при условии работы в наиболее стерильном окружении из доступных. В идеале стоило бы воспользоваться стерильным и чистым главбоксом (glovebox). Существует много несложных способов конструирования главбоксов; на популярных микологических сайтах можно найти большое количество их схем. Если же ж у вас отсутствует сам главбокс или желание его конструировать, все следующие шаги с успехом могут быть осуществлены с использованием техники "oven tek." Которая состоит в привлечении обычной духовки, как способа снижения количества микроорганизмов. Реализуется она следующим способом. Зажгите огонь. Опустите дверцу. Теперь вы можете использовать ее как рабочую поверхность, или наполовину вытянуть один из лотков и работать на нем. Теория (недоказанная) состоит в том, что тепло, поднимаясь, заставляет летучие микроорганизмы также подниматься вверх, сохраняя таким способом вашу рабочую поверхность от их оседания и уменьшая число заражений.
Материалы:
— Пустые, стерильные шприцы
— Двухлитровая (можно больше) кастрюля
— Одна бутылка 91 % изопропилового спирта
— Несколько бумажных салфеток
— Зажигалка или спиртовка
— Рюмка
— Стерильный отпечаток спор
Процедура 1: Приготовление стерильного шприца
1. Наполовину наполните вашу кастрюлю водопроводной или дистилированой водой (используйте дистиллированную воду, если в водопроводной содержится большое количество минералов или химических добавок).
2. Кипятите воду на большом огне не менее десяти минут, этого должно хватить для стерилизации.
3. Возьмите пустой шприц и наберите в него кипятку. Пусть горячая вода остается в нем на протяжении приблизительно двух минут.
4. Выпрысните горячую воду из шприца в раковину (не назад в кастрюлю).
5. Повторите шаги 3 и 4 еще два раза. После второго раза оставьте горячую воду в шприце.
6. Поместите шприц в прохладное чистое место, лучше в чистом zip-lock пакете.
7. Дайте ему остыть несколько часов, перед тем как переходить к процедуре 2.
Процедура 2: Перемещение спор в шприц
1. Сначала очистите вашу рабочую зону. Для этого протрите все рабочие поверхности слабым раствором побелки и щедро увлажните рабочую зону дезинфикатом наподобие Лизола.
2. Поместите в glovebox или на рабочую поверхность дверцы духовки: рюмку, остывшие шприцы, бутылочку со спиртом, бумажную салфетку, отпечаток спор (все еще в zip-lock пакете) и зажигалку или спиртовку.
3. Помойте руки с антибактериальным мылом перед тем как продолжать.
4. Сложите салфетку треугольником и увлажните ее кончик спиртом.
5. С помощью пропитанной спиртом салфетки протрите внутреннюю поверхность рюмки, основательно стерилизуя, таким образом, поверхность которую вы будете использовать для перемещения. Позвольте рюмке высохнуть, это не должно забрать более нескольких секунд.
6. Снимите колпачок со стерильного шприца и в пламени зажигалки простерилизуйте иглу. Потом протрите ее пропитанной спиртом салфеткой. Далее, пока этого прямо не потребует инструкция, попытайтесь ничего не касаться иглой.
7. ПРИМЕЧАНИЕ: очень важно проделывать все настолько быстро насколько только возможно, чтобы свести на нет возможность того, что зараза попадет в вашу рабочую зону и таким образом испортит ваш шприц.
8. Достаньте отпечаток из упаковки. Разверните его таким образом, чтобы получить доступ к спорам. Легонько соскребите иглой от шприца часть отпечатка в рюмку. Для отпечатка среднего размера обычно хватает 1/5 отпечатка.
9. Теперь у вас в рюмке находится небольшая заметная коллекция спор. Выпрысните из шприца (не более половины) воды в рюмку, осторожно смывая споры.
10. Втяните воду со спорами в шприц. Если нужно выпрысните еще немного воды в рюмку чтобы повторно втянуть взвесь и вобрать все споры.
11. После того как вы втянули взвесь спор в шприц, вода в нем должна приобрести темноватый оттенок, также можно заметить плавающие в воде небольшие скопления спор. Это будет означать, что вы успешно завершили процесс.
12. Стерилизуйте иглу еще раз с помощью пропитанной алкоголем салфетки, наденьте на иглу колпачок и поместите шприц обратно в чистый zip-lock пакет.
13. Взвесь спор в шприце должна отстаиваться на протяжении не менее 12 часов, перед тем как ее можно будет использовать для инокуляции банки. Это очень важный момент, так как перед тем как вводить споры в материал субстрата, они должны пройти процесс регидрации. Невыполнение этого пункта может привести к тому, что споры либо вообще не прорастут, либо будут прорастать очень медленно.
