Распространение инфекции:

а) каналикулярно, то есть через цервикальный канал, полость матки, маточные трубы на брюшину и органы брюшной полости (в распространении хламидий могут участвовать сперматозоиды);

б) лимфогенно – по лимфатическим капиллярам;

в) гематогенно – о чем свидетельствуют экстрагенитальные поражения (глотка, суставные сумки).

Лабораторная идентификация.

Цитологический метод – окраска препаратов из клинических материалов по Романовскому-Гимза, по Гименезу, по Макиавелли, окраска раствором Люголя. Для постановки предварительного диагноза хламидиоза достаточно обнаружить одно типичное цитоплазматическое включение. Одновременно учитывается количество лейкоцитов как показателя воспаления, а также дополнительная информация о наличии сопутствующей бактериальной микрофлоры (дрожжеподобных грибов, трихомонад и т.п.). Чувствительность метода составляет 10-20%.

Культуральный метод – выделение хламидий на клеточных линиях L-929, Mс Coy, Hela, куриных эмбрионах и др. Для его осуществления необходима быстрая транспортировка клинического материала на холоде (6+2°С), чтобы сохранить жизнеспособность находящихся в нём хламидий. Кроме того, выделение последних не стандартизировано и продолжительно, затруднено при использовании пациенткой любрикантов, спринцеваний, спермицидов или при заборе материала для исследования тампоном, содержащим вату, дакрон. Чувствительность метода, по данным разных авторов, колеблется в пределах 40 – 70%, но специфичность метода остается 100%. Результаты культурального исследования получают через 2-3 дня. Последний считается положительным, если обнаруживается хотя бы одно хламидийное внутрицитоплазматическое включение и нет причин подозревать контаминацию другим положительным образцом.

Иммунологические методы.

Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ): выявление антигенов хламидий путем обработки препаратов меченными флюоресцеином моноклональными антителами к родоспецифическим и видоспецифическим антигенам этого инфекционного агента и люминисцентной микросопии: на красном или оранжевом фоне цитоплазмы эпителиальных клеток определяются округлые яблочно-зеленые элементарные тельца 200-300 нм. Требуется более 5 клеток цилиндрического эпителия в одном поле зрения. Диагностическая ценность ПИФ связана с тем, что с ее помощью выявляются не только корпускулярные, но и растворимые антигены хламидий. Этот метод не зависит от возможного изменения тинкториальных свойств микроорганизма в процессе заболевания и лечения. При использовании моноклональных антител результат считают положительным при наличии 10 ЭТ в поле зрения или хотя бы одного внутриклеточного включения. ПИФ – важный скрининговый метод диагностики хламидиоза. Чувствительность и специфичность метода составляют, соответственно, 55-76% и 98%. Чувствительность метода низкая при малых количествах элементарных телец в препарате.

Непрямая иммунофлюресценция (НИФ) применяется в тех случаях, когда нет в наличии антихламидийных антител. В этих случаях приготовленный тем же методом, что и для ПИФ препарат из клинических проб обрабатывают вначале антихламидийными антителами, полученными путем иммунизации хламидиями овец, кроликов, мышей или других животных, а затем второй сывороткой, специфичной для вида животного, которое было иммунизировано хламидиями. Антитела второй сыворотки конъюгированы с ФИТЦ. Показания к применению и специфичность данного метода совпадают с ПИФ.

Иммуноферментный анализ для определения антигена (ИФА-АГ) хламидий с использованием моноклональных антихламидийных антител варьирует от прямого обнаружения антигена до захвата антигена с использованием или без использования ферментной амплификации с целью увеличения чувствительности метода. Чувствительность и специфичность метода – от 20 до 85% и зависят от вида тест-системы и перекрёстного реагирования с липополисахаридом (антигеном) других микроорганизмов. Результат исследования определяют с помощью специальных ридеров, позволяющих определять оптическую плотность образца при определенной длине волны (обычно – при 492 нм). Образцы, дающие значения оптической плотности выше или равные значениям отсекающего поглощения (cut-off), считаются положительными.

Иммунохроматографический анализ и и ферментоспецифическая реакция выявляют в исследуемом материале антигены хламидий у постели больного (Bed Side) при скрининговых исследованиях: накопление в зоне учета результатов реакции иммунных комплексов, содержащих метки, приводит к образованию окрашенной полосы (розового цвета различной интенсивности), учитываемой визуально. Широкое применение тестов ограничивается ввиду недостаточно высокой чувствительности и специфичности по сравнению с методами амплификации нуклеиновых кислот (МАНК) хламидий.

Метод выявления антител к C. Trachomatis (серологический). ИФА на наличие антител: антиген фиксируется на твердой поверхности, обрабаты-вается испытуемой сывороткой, а затем антивидовым иммуноглобулином, связанным с ферментом, визуализирующимся после добавления субстрата. Следует учитывать, что у некоторых людей иммунный ответ на урогенитальную хламидийную инфекцию может быть отсрочен или даже отсутствовать после инфицирования. В случаях, где иммунный ответ есть, антитела часто сохраняются в течение длительного времени после выздоровления. По этим причинам для диагностики отдельных случаев хламидиоза этот метод не рекомендуется, но может быть использован при оценке фазы заболевания путём регистрации определённых классов иммуноглобулинов к специфическому хламидийному липополисахариду: первичная / острая (Ig G, Ig A, Ig M), хроническая (Ig A, Ig G), реактивация или реинфекция (Ig A, Ig M), состояние после реконвалесценции (Ig G). Следует учесть, что при недостоверном определении титра IgA подтверждение осуществляется при помощи определения Ig M. IgM является маркером острой стадии заболевания и определяется уже через пять дней после его начала. В течение 10−ти дней после появления патологических симптомов происходит смена IgM на IgA, незначительное время могут одновременно присутствовать Ig M и Ig A. В это же время или с небольшой задержкой в 2−3 недели могут быть определены и IgG. Переход в хроническую стадию болезни характеризуется появлением Ig A, Ig G- антител.

Для адекватной интерпретации результатов серодиагностики хламидиоза следует определять такое понятие как “пограничные титры”. Это – наименьшие возможные разведения, в которых тест-системы определяют антитела против хламидии. “Пограничные титры” для IgM – 1:50, IgA – 1:50, IgG – 1:100. Так называемые “диагностические титры” могут подтверждать клинический диагноз, стадию процесса, необходимость назначения антибактериального лечения (табл.1). При реинфекции и реактивации происходит cкачкообразный подъем титров IgG, изменения титра IgA идут параллельно с титром IgM, однако на более низком уровне. У лиц, не получающих в период реинфекции лечения, титр IgG cохраняется на неизменном уровне. Выявление на протяжении длительного периода титра только IgG указывает на состояние реконвалесценции после перенесенной хламидийной инфекции (“серологические шрамы”). Исследуя титры антител IgG, IgA, IgM, можно оценивать эффективность проведенного лечения в отдаленном периоде (через 1−1,5 месяца).

Таблица 1

Диагностический диапазон титров антител IgG, IgA, IgM при хламидиозе

Стадия заболевания

Дипазон титров IgG

Диапазон титров IgA

Диапазон титров Ig M

Первичная/острая

Определяются Ig M

>100−6400

> 50−1600

> 50−3200

Хроническая

Определяются Ig А

>100−1600

>50−200

<50

Реактивация/Реинфекция

Определяются Ig G, IgA

>100−51200

>50−400