До и после АТ у рабочих определялись следующие показатели:
канцероген-белковые аддукты трех типов — содержание бензидина, 2-нафтиламина или 3-ОАК;
количественное содержание иммунных комплексов (ИК);
количественное содержание иммуноглобулинов;
иммуносупрессивное действие сыворотки крови рабочих.
КБА определяли методом встречной иммунодиффузии в агаре. Тест-системой для определения КБА служили иммуносыворотки кроликов, содержащие антитела против канцерогенов как гаптенов. Для иммунизации кроликов и получения иммуносывороток были использованы синтетические, содержащие канцерогены бензидин, 2-нафтиламин и 3-ОАК-азопротеины. Азопротеины получали путем диазотирования аминогрупп канцерогенов и последующего азосочетания полученных диазосоединений с альбуминами лошадиной сыворотки крови.
Содержание иммуноглобулинов и ИК определяли для оценки воздействия на гуморальный иммунитет рабочих РАВ, играющих важную роль в противоопухолевой защите организма. Образование ИК антиген — антитело отражает фазу нормального иммунного ответа, направленного на удаление чужеродных веществ. Все экзо- и эндоантигены, в том числе и КБА, можно считать индукторами образования ИК. Предполагается важная роль ИК в иммунорегуляции: взаимодействуя с клеточными рецепторами, ИК могут модулировать Т- и В-системы иммунитета. В связи с этим определение ИК у рабочих до и после АТ представляет интерес как для оценки гуморального иммунитета, так и для исследования степени воздействия на него КБА. Для определения количества ИК использовали метод, основанный на селективной преципитации комплексов антиген — антитело в 3,75% полиэтиленгликоле с последующим фотометрическим определением плотности преципитата. Количественное определение IgA, IgM и IgG проводилось при помощи метода иммунодиффузии по Манчини. Иммуносупрессивное действие сыворотки крови рабочих определяли путем исследования ее влияния на образование антителообразующих клеток (АОК) к эритроцитам барана (ЭБ) у мышей линии BALB/C в реакции локального гемолиза в геле.
Тест подавления сывороткой крови больных АОК к ЭБ был предложен для иммунодиагностики рака легких. При помощи этого теста было показано, что количество АОК к ЭБ у мышей, которым вводили сыворотку крови рабочих, содержащую КБА, статистически достоверно ниже, чем в селезенке мышей, которые получали сыворотку крови рабочих, не содержащую КБА. Следует отметить, что вопрос о роли и значении гуморальных иммунодепрессантов имеет общебиологическое значение и широко используется при различных патологических состояниях, в том числе и при опухолях. В сыворотке крови онкологических больных обнаружены гуморальные факторы, которые ингибируют самые различные иммунологические реакции, причем супрессия может носить как специфический, так и неспецифический характер. В связи с этим изучение гуморальных супрессивных факторов у рабочих с профессиональным онкологическим риском до и после АТ представляет значительный интерес как для разработки критериев оценки эффективности ароматерапии риска, так и для дальнейшего изучения механизмов этиопатогенеза профессиональных опухолей. Для стандартизации данных, полученных в нескольких опытах, в связи с тем что количество АОК в контроле может значительно варьировать от опыта к опыту, результаты определения АОК рассматривали в виде коэффициента иммунного ответа (КИО):
где число АОК в опыте представляло количество АОК, образующихся в селезенке мышей, которым вводили сыворотку крови рабочих и ЭБ, а число АОК в контроле — количество АОК в селезенке мышей, которым вводили только ЭБ. Статистическую обработку полученных материалов исследований проводили при помощи t-критерия Стьюдента.
Результаты проведенных исследований показали следующее (рис. 11). До АТ КБА, содержащие 3-ОАК, были выявлены в крови 48 из 50 отобранных рабочих (98%); содержащие бензидин — у 27 из 50 рабочих (54%), а 2-нафтиламин — у 18 человек (36%). Общая группа повышенного онкологического риска (лица, содержащие один, два или три маркера одновременно) составила 100%: в крови всех 50 отобранных рабочих были обнаружены КБА, содержащие 3-ОАК, бензидин или 2-нафтиламин. После АТ КБА, содержащие 3-ОАК, были обнаружены у 7 человек (14%), бензидин — у 6 (12%) и 2-нафтиламин — у одного (2%). Общая группа риска после АТ составила 10 человек (20%). Таким образом, после АТ число рабочих, в крови которых содержались 3-ОАК- КБА, сократилось в 7 раз, бензидин- КБА — в 4,5 раза, 2-нафтиламин- КБА — в 18 раз. Общая группа повышенного онкологического риска (безотносительно канцерогена, входящего в состав КБА) сократилась в 5 раз.
Рис. 11. Влияние ароматерапии на содержание в крови рабочих 3-АОК, иммунные комплексы (ИК) и коэффициент иммунного ответа (КИО).
1 — до начала процедур; 2 — по окончании процедур; а — содержание в крови 3-ОАК; б — содержание иммунных комплексов; в — коэффициент иммунного ответа.
Снижение после АТ числа рабочих, в крови которых имелись КБА, отражалось на результате определения у них количества ИК: если до АТ среднее количество ИК составляло 158,1, то после окончания курса ингаляций оно снизилось до 128,8 (различия статистически достоверны).
Средние значения иммуноглобулинов в группе рабочих до АТ составило: IgA — 2,16, IgM — 1,38, IgG — 9,32, а после окончания курса — соответственно 2,02 (Р<0,05), 1,53 (Р<0,05) и 8,9 (Р<0,05) (Р — степень достоверности по сравнению с контрольной группой рабочих до АТ). Эти результаты свидетельствуют о статистически достоверном увеличении в сыворотке крови рабочих после АТ из трех исследованных классов иммуноглобулинов только IgM.
Результаты исследований влияния сыворотки крови рабочих на образование АОК к ЭБ оказались следующими. В группе рабочих до АТ КИО составлял 38,7, в то время как после АТ — 72,1 (Р<0,05). Увеличение коэффициента иммунного ответа после АТ указывает на то, что снижение частоты регистрации в сыворотке крови рабочих КБА, наблюдаемое после вдыхания РАВ, сопровождается снижением ее иммунодепрессивного действия на образование антите-лообразующих В-лимфоцитов в ответ на антигенную стимуляцию. Об этом свидетельствует также увеличение содержания IgM в сыворотке крови рабочих после ароматерапии.
Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что РАВ эфирных масел, вызывая уменьшение частоты регистрации эндогенных факторов риска — КБА и препятствуя возникновению связанных с их появлением нарушений иммунореактивности, могут быть использованы для разработки новых нетрадиционных методов АТ повышенного профессионального онкологического риска.
Глава 22. ФИЗИОТЕРАПИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ
Природные и преформированные физические факторы должны развиваться параллельно и дополнять друг друга. В этом плане, на наш взгляд, особенно целесообразно сочетанное применение некоторых физиотерапевтических процедур с эфирными маслами.
Для изучения в экспериментах на животных распределения эфирных масел в органах и тканях, их концентрации при различных путях введения, скорость элиминации из организма, надо было пометить эфироносное растение углеродом 14С.
Способ введения 14С в вегетирующие растения лаванды настоящей и монарды дудчатой с последующей отгонкой ЭМ из цветков и соцветий состоял в следующем: растение помещали в герметическую прозрачную камеру с радиоактивной 14СО, (объем камеры — 0,4 м 3 , концентрация 14СО 2 — 1%, удельная активность составляла 100 мБк/м.куб.).
Более простой способ состоял в выдерживании базальных частей свежесрезанных растений в растворе меченной 14С сахарозы с удельной активностью 3—4 мБк/мл.
Радиоуглерод, ассимилированный из 14С сахарозы или 14СО, при фотосинтезе, включался в реакции синтеза ЭМ. Удельная активность ЭМ соответствовала 400 кБк/мл. Измерение проводилось газоразрядным детектором. Описанный способ метки с 14СО 2 применялся в исследованиях поступления и распределения ЭМ в организме животных.
